தயாரிப்புகள்
2019-nCoVக்கான Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR கண்டறிதல் கருவி
எதிர்பார்க்கப்படும் பயன்பாடு
புதிய கொரோனா வைரஸின் (2019-nCoV) தொண்டை ஸ்வாப்கள், நாசோபார்னீஜியல் ஸ்வாப்ஸ், மூச்சுக்குழாய் அழற்சி திரவம், ஸ்பூட்டம் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி இந்த கிட் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இந்த தயாரிப்பின் கண்டறிதல் முடிவு மருத்துவக் குறிப்பிற்கு மட்டுமே, மேலும் இதை மட்டும் பயன்படுத்தக்கூடாது. மருத்துவ நோயறிதல் மற்றும் சிகிச்சைக்கான சான்றுகள். நோயாளியின் மருத்துவ வெளிப்பாடுகள் மற்றும் பிற ஆய்வக சோதனைகளுடன் இணைந்து நிலைமையின் விரிவான பகுப்பாய்வு பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
ஆய்வுக் கொள்கை
கிட் ஒரு படி RT- PCR தொழில்நுட்பத்தை அடிப்படையாகக் கொண்டது.உண்மையில், 2019 புதிய கொரோனா வைரஸ் (2019-nCoV) ORF1ab மற்றும் N மரபணுக்கள் பெருக்க இலக்கு பகுதிகளாக தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டன.குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வுகள் (N மரபணு ஆய்வுகள் FAM மற்றும் ORF1ab ஆய்வுகள் HEX என பெயரிடப்பட்டுள்ளன) மாதிரிகளில் 2019 புதிய வகை கொரோனா வைரஸ் RNA கண்டறிய வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது.மாதிரி சேகரிப்பு, ஆர்என்ஏ மற்றும் பிசிஆர் பெருக்கம் ஆகியவற்றின் செயல்முறையை கண்காணிக்கும், அதன் மூலம் தவறான எதிர்மறையான முடிவுகளைக் குறைக்கும் ஒரு எண்டோஜெனஸ் இன்டர்னல் கண்ட்ரோல் கண்டறிதல் அமைப்பு (சிஒய்5 என பெயரிடப்பட்ட உள் கட்டுப்பாட்டு மரபணு ஆய்வு) உள்ளது.
முக்கிய கூறுகள்
| கூறுகள் | தொகுதி(48T/கிட்) |
| RT-PCR எதிர்வினை தீர்வு | 96µl |
| nCOV ப்ரைமர் TaqMan probexture (ORF1ab,N ஜீன்,RnaseP ஜீன்) | 864µl |
| எதிர்மறை கட்டுப்பாடு | 1500µl |
| nCOV நேர்மறை கட்டுப்பாடு (l ORF1ab N ஜீன்) | 1500µl |
சொந்த எதிர்வினைகள்: ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் அல்லது சுத்திகரிப்பு உலைகள்.எதிர்மறை/நேர்மறை கட்டுப்பாடு: நேர்மறைக் கட்டுப்பாடு என்பது இலக்கு துண்டைக் கொண்ட ஆர்என்ஏ ஆகும், அதே சமயம் எதிர்மறை கட்டுப்பாடு நியூக்ளிக் அமிலம் இல்லாத நீர்.பயன்பாட்டின் போது, அவர்கள் பிரித்தெடுப்பதில் பங்கேற்க வேண்டும் மற்றும் தொற்றுநோயாக கருதப்பட வேண்டும்.அவை தொடர்புடைய விதிமுறைகளின்படி கையாளப்பட்டு அகற்றப்பட வேண்டும்.
உள் குறிப்பு மரபணு மனித RnaseP மரபணு ஆகும்.
சேமிப்பு நிலைமைகள் மற்றும் காலாவதி தேதி
-20±5℃, 6 மாதங்களுக்கு செல்லுபடியாகும், மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் 5 முறைக்கு மேல் கரைவதைத் தவிர்க்கவும்.
பொருந்தக்கூடிய கருவி
FAM / HEX / CY5 மற்றும் பிற பல சேனல் ஃப்ளோரசன்ட் PCR கருவியுடன்.
மாதிரி தேவைகள்
1.பொருந்தக்கூடிய மாதிரி வகைகள்: தொண்டை ஸ்வாப்கள், நாசோபார்னீஜியல் ஸ்வாப்ஸ், மூச்சுக்குழாய் அழற்சி திரவம், ஸ்பூட்டம்.
2. மாதிரி சேகரிப்பு (அசெப்டிக் நுட்பம்)
குரல்வளை ஸ்வாப்: டான்சில்ஸ் மற்றும் பின்புற தொண்டைச் சுவரை ஒரே நேரத்தில் இரண்டு ஸ்வாப்களால் துடைத்து, பிறகு ஸ்வாப் தலையை மாதிரிக் கரைசல் உள்ள சோதனைக் குழாயில் அமிழ்த்தவும்.
ஸ்பூட்டம்: நோயாளிக்கு ஆழ்ந்த இருமல் ஏற்பட்ட பிறகு, மாதிரி கரைசலைக் கொண்ட ஒரு திருகு தொப்பி சோதனைக் குழாயில் இருமல் ஸ்பூட்டத்தை சேகரிக்கவும்;மூச்சுக்குழாய் அழற்சி திரவம்: மருத்துவ நிபுணர்களின் மாதிரி.3. மாதிரிகளின் சேமிப்பு மற்றும் போக்குவரத்து
வைரஸ் தனிமைப்படுத்தல் மற்றும் RNA சோதனைக்கான மாதிரிகள் கூடிய விரைவில் சோதிக்கப்பட வேண்டும்.24 மணி நேரத்திற்குள் கண்டறியக்கூடிய மாதிரிகள் 4℃ இல் சேமிக்கப்படும்;24க்குள் கண்டறிய முடியாதவை
மணிநேரம் -70℃ அல்லது அதற்குக் கீழே சேமிக்கப்பட வேண்டும் (சேமிப்பு நிலை -70℃ இல்லை என்றால், அவை இருக்க வேண்டும்
தற்காலிகமாக -20℃ குளிர்சாதன பெட்டியில் சேமிக்கப்படும்).போக்குவரத்தின் போது மாதிரிகள் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் கரைவதைத் தவிர்க்க வேண்டும்.மாதிரிகள் சேகரிக்கப்பட்டவுடன் கூடிய விரைவில் ஆய்வகத்திற்கு அனுப்பப்பட வேண்டும்.மாதிரிகள் நீண்ட தூரத்திற்கு கொண்டு செல்லப்பட வேண்டும் என்றால், உலர் பனி சேமிப்பு பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
சோதனை முறைகள்
1 மாதிரி செயலாக்கம் மற்றும் RNA பிரித்தெடுத்தல் (மாதிரி செயலாக்க பகுதி)
ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கு 200μl திரவ மாதிரியை எடுக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.தொடர்புடைய பிரித்தெடுத்தல் படிகளுக்கு, வணிக RNA பிரித்தெடுத்தல் கருவிகளின் வழிமுறைகளைப் பார்க்கவும்.எதிர்மறை மற்றும் எதிர்மறை இரண்டும்
இந்த கிட்டில் உள்ள கட்டுப்பாடுகள் பிரித்தெடுப்பதில் ஈடுபட்டுள்ளன.
2 பிசிஆர் ரீஜென்ட் தயாரிப்பு (உருவாக்க தயாரிப்பு பகுதி)
2.1 கிட்டில் இருந்து அனைத்து கூறுகளையும் அகற்றி, அறை வெப்பநிலையில் கரைத்து கலக்கவும்.பயன்பாட்டிற்கு முன் சில வினாடிகளுக்கு 8,000 ஆர்பிஎம்மில் மையவிலக்கு;தேவையான அளவு உலைகளைக் கணக்கிடுங்கள், மேலும் பின்வரும் அட்டவணையில் காட்டப்பட்டுள்ளபடி எதிர்வினை அமைப்பு தயாரிக்கப்படுகிறது:
| கூறுகள் | N சேவை (25µl அமைப்பு) |
| nCOV ப்ரைமர் TaqMan ஆய்வு கலவை | 18 µl × N |
| RT-PCR எதிர்வினை தீர்வு | 2 µl × N |
| *N = சோதனை செய்யப்பட்ட மாதிரிகளின் எண்ணிக்கை + 1 (எதிர்மறை கட்டுப்பாடு) + 1 (nCOVநேர்மறை கட்டுப்பாடு) | |
2.2 கூறுகளை நன்கு கலந்த பிறகு, குழாயின் சுவரில் உள்ள அனைத்து திரவமும் குழாயின் அடிப்பகுதியில் விழும்படி சிறிது நேரத்திற்கு மையவிலக்கு செய்து, பின்னர் PCR குழாயில் 20 µl பெருக்க அமைப்பை மாற்றவும்.
3 மாதிரி (மாதிரி தயாரிப்பு பகுதி)
பிரித்தெடுத்த பிறகு 5μl எதிர்மறை மற்றும் நேர்மறை கட்டுப்பாடுகளைச் சேர்க்கவும்.சோதிக்கப்பட வேண்டிய மாதிரியின் ஆர்என்ஏ பிசிஆர் எதிர்வினைக் குழாயில் சேர்க்கப்படுகிறது.
குழாயை இறுக்கமாக மூடி, 8,000 ஆர்பிஎம்மில் மையவிலக்கை சில வினாடிகளுக்கு பெருக்கி கண்டறிதல் பகுதிக்கு மாற்றவும்.
4 PCR பெருக்கம் (பெருக்கப்பட்ட கண்டறிதல் பகுதி)
4.1 கருவியின் மாதிரி கலத்தில் எதிர்வினைக் குழாயை வைத்து, அளவுருக்களை பின்வருமாறு அமைக்கவும்:
| மேடை | மிதிவண்டி எண் | வெப்ப நிலை(°C) | நேரம் | சேகரிப்புதளம் |
| தலைகீழ்படியெடுத்தல் | 1 | 42 | 10நிமி | - |
| முன் மறதிn | 1 | 95 | 1 நிமிடம் | - |
| மிதிவண்டி | 45 | 95 | 15வி | - |
| 60 | 30கள் | தரவு சேகரிப்பு |
கருவி கண்டறிதல் சேனல் தேர்வு: ஃப்ளோரசன்ஸ் சிக்னலுக்காக FAM,HEX,CY5 சேனலைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.ஃப்ளோரசன்ட் NONE குறிப்புக்கு, தயவுசெய்து ROX ஐ தேர்வு செய்ய வேண்டாம்.
5 முடிவு பகுப்பாய்வு (அமைப்பதற்கான ஒவ்வொரு கருவியின் சோதனை வழிமுறைகளைப் பார்க்கவும்)
எதிர்வினைக்குப் பிறகு, முடிவுகளைச் சேமிக்கவும்.பகுப்பாய்விற்குப் பிறகு, படத்தின் படி ஆரம்ப மதிப்பு, முடிவு மதிப்பு மற்றும் தொடக்க மதிப்பை சரிசெய்யவும் (பயனர் உண்மையான சூழ்நிலைக்கு ஏற்ப சரிசெய்யலாம், தொடக்க மதிப்பை 3~15 ஆக அமைக்கலாம், முடிவு மதிப்பை அமைக்கலாம் 5~20, சரிசெய்தல்) மடக்கை வரைபடத்தில் சாளரத்தின் வாசலில், வாசல் கோடு மடக்கை கட்டத்தில் உள்ளது, மேலும் எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டின் பெருக்க வளைவு ஒரு நேர் கோடு அல்லது வாசல் கோட்டிற்கு கீழே உள்ளது).
6 தரக் கட்டுப்பாடு（செயல்முறைக் கட்டுப்பாடு சோதனையில் சேர்க்கப்பட்டுள்ளது
COV நேர்மறை கட்டுப்பாடு: FAM மற்றும் HEX கண்டறிதல் சேனல்களின் வெளிப்படையான பெருக்க வளைவு, Ct மதிப்பு≤32, ஆனால் CY5 சேனலின் பெருக்க வளைவு இல்லை;
மேற்கண்ட தேவைகள் ஒரே பரிசோதனையில் ஒரே நேரத்தில் பூர்த்தி செய்யப்பட வேண்டும்;இல்லையெனில், சோதனை தவறானது மற்றும் மீண்டும் செய்யப்பட வேண்டும்.
7 முடிவுகளை தீர்மானித்தல்.
7.1 சோதனை மாதிரியின் FAM மற்றும் HEX சேனல்களில் பெருக்க வளைவு அல்லது Ct மதிப்பு> 40 இல்லாவிடில், CY5 சேனலில் பெருக்க வளைவு இருந்தால், 2019 புதிய கொரோனா வைரஸ் (2019-nCoV) இல்லை என்று தீர்மானிக்க முடியும். மாதிரியில் RNA;
.2 சோதனை மாதிரியானது FAM மற்றும் HEX சேனல்களில் வெளிப்படையான பெருக்க வளைவுகளைக் கொண்டிருந்தால் மற்றும் Ct மதிப்பு ≤40 ஆக இருந்தால், அந்த மாதிரி 2019 புதிய கொரோனா வைரஸுக்கு (2019-nCoV) சாதகமானது என்று தீர்மானிக்க முடியும்.
7.3 சோதனை மாதிரியானது FAM அல்லது HEX இன் ஒரு சேனலில் மட்டுமே தெளிவான பெருக்க வளைவைக் கொண்டிருந்தால், மேலும் Ct மதிப்பு ≤40 ஆக இருந்தால், மற்ற சேனலில் பெருக்க வளைவு இல்லை என்றால், முடிவுகளை மீண்டும் சோதிக்க வேண்டும்.மறுபரிசோதனை முடிவுகள் சீரானதாக இருந்தால், மாதிரியானது புதியதற்கு சாதகமாக இருக்கும் என்று தீர்மானிக்கலாம்
கொரோனா வைரஸ் 2019 (2019-nCoV).மறுபரிசீலனை முடிவு எதிர்மறையாக இருந்தால், 2019 புதிய கொரோனா வைரஸுக்கு (2019-nCoV) மாதிரி எதிர்மறையானது என்று தீர்மானிக்க முடியும்.
நேர்மறை தீர்ப்பு மதிப்பு
ROC வளைவு முறை கருவியின் குறிப்பு CT மதிப்பை தீர்மானிக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது மற்றும் உள் கட்டுப்பாட்டு குறிப்பு மதிப்பு 40 ஆகும்.
சோதனை முடிவுகளின் விளக்கம்
1.ஒவ்வொரு பரிசோதனையும் எதிர்மறை மற்றும் நேர்மறை கட்டுப்பாடுகளுக்கு சோதிக்கப்பட வேண்டும்.கட்டுப்பாடுகள் தரக் கட்டுப்பாட்டுத் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்யும் போது மட்டுமே சோதனை முடிவுகளைத் தீர்மானிக்க முடியும்
2.FAM மற்றும் HEX கண்டறிதல் சேனல்கள் நேர்மறையாக இருக்கும்போது, CY5 சேனலின் (உள்கட்டுப்பாட்டு சேனல்) முடிவு கணினி போட்டியின் காரணமாக எதிர்மறையாக இருக்கலாம்.
3.உள்கட்டுப்பாட்டு முடிவு எதிர்மறையாக இருக்கும்போது, சோதனைக் குழாயின் FAM மற்றும் HEX கண்டறிதல் சேனல்களும் எதிர்மறையாக இருந்தால், கணினி முடக்கப்பட்டுள்ளது அல்லது செயல்பாடு தவறாக இருந்தால், சோதனை தவறானது.எனவே, மாதிரிகள் மீண்டும் பரிசோதிக்கப்பட வேண்டும்.
